血浆样品

（不能用肝素抗凝）

(1) 用采血针和EDTA抗凝管抽取全血，轻柔上下颠倒混匀后室温或者4°C保存，并在1小时内进行下一步处理；

(2)  4°C条件下，3000× g离心15min，小心吸取上清，注意避免吸入底部和侧面的沉淀物；

(3) 将血浆冻存于-80°C；

提示：送样量最好4 ml以上（分离4 ml血浆约需要8-10 ml全血）。

>2ml

血清样品

（有条件的话尽量采用血浆，避免血小板来源的外泌体影响）

(1) 用采血针和普通采血管（不含抗凝剂，10ml规格）采血10 ml；

(2) 室温静置 30 min，然后4°C条件下，静置3-4小时（此时可见血块析出）；

(3) 用移液器吸取上面的淡黄色血清（应该有4 ml左右）转入15 ml离心管中，4°C条件下 3000g离心15min，小心取上清转入新的离心管中；

(4) 将血清样品置于-80°C保存；

提示：送样量最好4 ml以上（分离4 ml血清约需要10-15ml全血）。

>2ml

细胞上清

（需采用去除外泌体的培养基）

细胞培养基必须使用去除 exosome的血清或者无血清培养基，以降低背景值的干扰（牛血清中含有大量牛源外泌体）。

(1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在70 %-80 %，悬浮细胞密度在60 %-70 %；

(2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，换为新的不含外泌体的培养基或者无血清培养基；对于悬浮细胞，300 g，4°C，10 min收集细胞；

(3) 使用不含外泌体的培养基或者无血清培养基悬浮细胞并继续培养。细胞继续培养24-48 小时，根据细胞的生长速度确定收取上清时间；

(4) 收集细胞上清，300 g，4°C，离心10 min；小心吸取上清，注意避免吸入细胞或者细胞碎片；

(5)  3000 g，4°C，再次离心15 min，确保将细胞或者细胞碎片去除干净；

(6) 上清0.22µm过滤，去除细胞碎片、凋亡小体和微囊泡；

(7) 上清可在4°C短期保存（1-2天），长期保存可冻存于-80°C 。建议细胞上清分离后尽快进行外泌体分离，保存在4°C和-80°C，都会对产量有一定的影响。

>20ml

尿液

(1) 无菌容器采集前/中后段晨尿100ml，并注意避免细菌污染，收集前注意对饮食的控制，于4℃临时保存（不得超过8 h）；

加入蛋白酶抑制剂混合物（1.67 ml of100mM NaN3, 2.5ml PMSF (2 mg/ml in isopropyl alcohol), 50 µl Leupeptin (1 mg/ml in ddH2O)）；

(2) 并于3000×g离心15min，去除细胞或细胞碎片；

(3)  -80℃冰箱中保存。

>20ml

脑脊液

(1) 收集脑脊液10ml，采集方式为腰椎穿刺，样本一经分离，请务必立即置于冰上或4℃短暂保存（不得超过4 h）,避免受到血液污染,勿使用含肝素抗凝剂的采样管收集盛放；

(2)  -80℃冰箱中保存。

10ml

胸水

(1) 临床收集胸水后若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将收集到的胸水1000 g离心10 min，收集上清液；

(3) 将得到的胸水上清3000 g离心10 min，收集上清；

(4)  -80℃冰箱中保存。

30ml

腹水

(1) 临床收集腹水后若不能第一时间处理，请于4℃临时保存（不得超过8 h）；

(2) 将采集到的腹水在4℃下（室温亦可）离心2000 g，20 min，去除腹水中的残渣；

(3) -80℃冰箱中保存。

30ml

胆汁

(1) 用无菌容器收集胆汁；

(2) 将收集到的胆汁在4℃下，3000 g离心10 min去除细胞沉渣和碎片；

(3) 收集胆汁上清液，4℃或者-20℃长期保存。

5ml